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布鲁菌液体气溶胶肺部感染途径小鼠模型建立及(2)

作者:

关键词:

摘要：

1.2.3 临床体征的观察和体重的测定分别于第0周（攻毒前2 d），攻毒后第2、4、6、8周观察并记录症状（耸毛、呼吸困难、强迫性腹部呼吸、被触摸或外部刺激后反应迟钝）；测定体重。

1.2.4 牛种布鲁菌S19-CN菌株在小鼠肺脏、脾脏内的定居力检测无菌分离脾脏和肺脏，称重，匀浆，5倍梯度稀释成不同浓度，每个稀释度设3个重复，10 μl/孔涂布于添加布鲁菌选择性添加剂的TSA方板培养基，37 ℃恒温倒置培养3～4 d，计数。

1.2.5 小鼠血清抗体IgG、IgM、IgA、IgG2a和IgG1检测分别在感染0、2、4、6、8周时，每组取6只小鼠，摘眼球取血，将血液于4 ℃静置过夜，3000 rpm离心5 min，收集血清，-20 ℃保存备用。按照ELISA试剂盒说明书操作方法，测定感染后小鼠血清抗体滴度。

1.2.6 小鼠血清、肺匀浆细胞因子检测匀浆后的肺组织3000 rpm离心5 min，收集血清，-20 ℃保存备用。按照细胞因子检测试剂盒说明书，测定感染前和感染后2、4、6、8周，血清、肺匀浆液细胞因子（IFN-γ和TNF-α）浓度的变化。

1.2.7 统计学处理应用SAS 9.3统计软件分析数据，定量资料呈正态分布，用±s表示，2组比较用2因素5个重复测量的重复测量设计方差分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠临床表现、体质量测定与空白对照组Z2、Z4相比，Z1、Z3小鼠状态均良好，无耸毛、呼吸困难、强迫性腹部呼吸、反应迟钝等表现；如图1A 、B、C示：Z2、Z3和Z4小鼠体质量持续平稳上升，Z1小鼠体质量在感染6周后有持续下降趋势，检测时间内组间差异均无统计学意义，所有小鼠在感染4周后，与第2周比较，体质量增加，差异有统计学意义（P均＜0.05）。

如图1D、E、F示：在第2周，Z1、Z3脾重均显著上升，Z1达到峰值，Z3持续上升，Z1＞Z2，Z3＞Z4，Z1＞Z3，差异有统计学意义（P均＜0.05）。在第4周，Z3达到峰值，Z1＞Z2，Z3＞Z4，Z1＜Z3，差异有统计学意义（P均＜0.05）。在第6周和第8周，Z1和Z3均迅速下降，组间差异均没有统计学意义。感染后不同时间点比较，实验组Z1、Z3组内差异均有统计学意义（P＜0.05），空白对照组组内差异均无统计学意义。

上述表明，与滴鼻途径相比，肺递送途径出现较早较明显的脾肿大。在第2周和第4周，Z1和Z3脾重均显著大于第0周，6周后与第0周相比均无显著差异，说明随着感染时间延长，脾肿大逐渐改善。

图1 小鼠体质量和脾重变化A、B、C.感染第0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠体质量变化；D、E、F.感染第0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠脾重变化。Z1.液体气溶胶肺递送接种108CFU布鲁氏菌S19-CN；Z2.液体气溶胶肺递送接种0.05%（体积百分比）泊洛沙姆188的生理盐水；Z3.滴鼻接种108CFU布鲁氏菌S19-CN；Z4.滴鼻接种0.05%（体积百分比）泊洛沙姆188的生理盐水。计算每个时间点各组数据的±s水平，★.P＜0.05，差异有统计学意义。Figure 1 Changes of mouse body weight and spleen weight

2.2 脾脏和肺脏载菌量检测空白对照组Z2、Z4脾肺载菌量均未检测到，图中未显示。如图2所示，在第0周，Z1、Z3脾肺载菌量检出量为0 CFU/g。脾脏载菌量：第2周，Z1和Z3均达到峰值，分别是（5.×106）CFU/g 和（2.×107）CFU/g，Z1 ＜ Z3，差异有统计学意义（P＜0.05）。2周后Z1和Z3脾脏载菌均显著下降，2周后各时间点比较2组之间差异均无统计学意义（P＞0.05），Z1第4周降到最低，为（1.×102）CFU/g，Z3 第 8 周降到最低，为（7.×103）CFU/g。

肺脏载菌量：第2周，Z1和Z3肺脏载菌量均达到峰值，Z1（8.×106）CFU/g，Z3（8.×106）CFU/g；2 周后迅速下降，至第8周，Z1、Z3肺脏载菌量达到最低值，Z1（7.×102）CFU/g，Z3（5.×102）C FU/g，感染后，2组之间差异均无统计学意义（P＞0.0 5）。检测时间点之间比较，Z 1、Z 3脾肺载菌量差异均有统计学意义（P＜ 0.0 5）。

图2 小鼠脾肺载菌量变化A.感染第0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠脾脏载菌量变化；B.感染第0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠肺脏载菌量变化Figure 2 Changes of bacteria burden in the mouse spleens and lungs

2.3 血清抗体水平的检测如图3所示，与空白对照组（Z2、Z4）（抗体水平均未检出图中未显示）相比，Z1和Z3血清抗体均在感染后2～8周内维持较高水平，第8周达到高峰取稀释度的log2，在感染后各检测时间点，Z1和Z3血清抗体水平比较，组间差异均无统计学意义（P均＞0.05）。

图3 小鼠血清抗体水平变化A.感染第0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠血清抗体IgG滴度变化；B.感染第0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠血清抗体IgM滴度变化；C.感染第0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠血清抗体IgA滴度变化；D.感染第0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠血清抗体IgG2a/IgG1滴度变化Figure 3 Changes of the mouse serum antibody levels

文章来源：《生态毒理学报》网址: http://www.stdlxbzz.cn/qikandaodu/2021/0707/1556.html